產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
HRbio™ miRNA cDNA Synthesis Kit（Stem Loop） HRbio™ miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(莖環(huán)法） | HRF0703 | 50 T |
產(chǎn)品描述
miRNA鏈cDNA合成試劑盒是采用莖環(huán)法原理的專用試劑盒， 5×Reaction Mix為一管式反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液，含有反轉(zhuǎn)錄所需的所有試劑（反轉(zhuǎn)錄酶、RNase Inhibitor、dNTPs、Buffer），只需加入模板RNA和莖環(huán)引物即可進(jìn)行反應(yīng)，使得cDNA的合成更加的方便快捷。
本試劑盒中使用了具有DNA分解活性的特殊gDNA Remover，不需要中途開蓋添加，只需一步操作，即可同時完成基因組清除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，大大的簡化了操作步驟，避免了繁雜的加樣過程對樣品造成的污染和RNA的降解。本試劑盒的反轉(zhuǎn)錄酶具有的熱穩(wěn)定性，經(jīng)過特別優(yōu)化的緩沖體系，限度保證各種miRNA特異性逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的合成。同時產(chǎn)物cDNA的兼容性好，可以適配市面上主流的熒光定量mix做下游檢測試驗。
miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(莖環(huán)法）
產(chǎn)品組分
組分 | HRF0703 |
5×Reaction mix | 200 μL |
gDNA Remover | 50 μL |
RNase free H20 | 1.5 mL |
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期1年。
注意事項
1）盡量避免RNase對樣品的污染；
2）為保證逆轉(zhuǎn)錄的成功，請盡量獲得高質(zhì)量的RNA樣品；
3）5×Reaction mix和gDNA Remover含有甘油，比較粘稠，溶液易掛壁和吸附在移液槍頭外導(dǎo)致產(chǎn)品損耗，因此，在使用前請點甩離心后使用，同時使用低吸附移液槍頭；
4）5×Reaction mix和gDNA Remover所包含的酶均足夠量。即使每次5×Reaction mix只用3.6μl或0.8μL的gDNA Remover都不會對使用效果造成影響。
5）本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
一、莖環(huán)法miRNA鏈cDNA合成(以20 μl反應(yīng)體系為例，可使用10μL體系)
1.使用前將每種溶液輕彈或者輕微渦旋振蕩混勻，可簡短離心以收集殘留在管壁的液體到管底。
2.在無RNase管里面加入以下成分：(建議使用PCR管冰上配制，置PCR儀反應(yīng))
組分 | 體積 |
Total miRNA | ≤2μg* |
Stem-loop primer(2μM) | 1μL |
5×Reaction mix | 4μL |
gDNA Remover | 1μL |
RNase free H20 | 補足到20μL |
* 在反應(yīng)中使用的total miRNA 必須包含有小分子RNA(miRNA)。此過程也可以使用富集的miRNA， 單miRNA無法直接用分光光度計定量，建議直接加入2μl ~5μl?？筛鶕?jù)目的miRNA豐度決定加入量，但是對于低豐miRNA 樣品而言(如血清血漿提取物)，可直接加入體積8 μl。
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