產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
| BCA Protein Assay Kit (BCA蛋白濃度測定試劑盒) | HRX0119 | 500T | 288 |
| BCA Protein Assay Kit (BCA蛋白濃度測定試劑盒) | HRX0120 | 2500T | 818 |
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品是一種即用型的總蛋白濃度測定試劑盒，由一系列確定濃度的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液組成。BCA試劑盒可通過測量562nm處的吸光度并與蛋白標(biāo)準(zhǔn)物的吸光度-濃度曲線進(jìn)行比較，快速測定總蛋白濃度。蛋白質(zhì)定量過程可以在45分鐘內(nèi)完成。
該產(chǎn)品基于BCA (Bicin -choninic Acid) 法研制而成，實現(xiàn)了對蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物。同時將Cu2+還原成Cu+。該測定法的紫色反應(yīng)產(chǎn)物是由兩個BCA分子與一個亞銅離子螯合形成的。 這種水溶性復(fù)合物在562nm處表現(xiàn)出很強(qiáng)的吸光度，在較寬的工作范圍 (20-2,000μg/ ml) 中， 隨著蛋白質(zhì)濃度的增加，吸光度幾乎呈線性。
BCA方法不是真正的端點方法，也就是說最終顏色會繼續(xù)變化。但是孵育后顏色變化的速度足夠慢可以允許分析大量的樣品。據(jù)報道蛋白質(zhì)的大分子結(jié)構(gòu)，肽鍵的數(shù)量以及四種特定氨基酸 (半g氨酸、g氨酸、s氨酸和l氨酸) 的存在與BCA的顏色形成有關(guān)。對二肽、三肽和四肽的研究表明顏色形成的程度不僅僅是由單個產(chǎn)生顏色的官能團(tuán)的總和引起的。
因此通常參考諸如牛血清白蛋白 (BSA) 的常見蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)來確定待測蛋白質(zhì)濃度。一系列確定濃度的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測物一起進(jìn)行測定，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定每個待測物的濃度。如果需要精確定量待測蛋白質(zhì)，建議選擇質(zhì)量與待測蛋白質(zhì)相似的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品。例如在測定免疫球蛋白樣品時，可以使用牛γ球蛋白 (BGG) 標(biāo)準(zhǔn)品。在介紹的兩種檢測法中，其中試管檢測法需要更大體積 (0.1mL) 的蛋白質(zhì)樣品，但是由于它使用的樣品與工作試劑之比為1:20 (v / v)，因此干擾物質(zhì)的影響降至低。
產(chǎn)品特性
| 組分 | 500 tests | 2500 tests |
| BCA Reagent A | 100 mL | 500 mL |
| BCA Reagent B | 3 mL | 5 mL × 3 |
| BSA 標(biāo)準(zhǔn)品①（0 μg/mL） | 1 mL | 1 mL × 5 |
| BSA 標(biāo)準(zhǔn)品②（25 μg/mL） | 1 mL | 1 mL × 5 |
| BSA 標(biāo)準(zhǔn)品③（125 μg/mL） | 1 mL | 1 mL × 5 |
| BSA 標(biāo)準(zhǔn)品④（250 μg/mL） | 1 mL | 1 mL × 5 |
| BSA 標(biāo)準(zhǔn)品⑤（500 μg/mL） | 1 mL | 1 mL × 5 |
| BSA 標(biāo)準(zhǔn)品⑥（750 μg/mL） | 1 mL | 1 mL × 5 |
| BSA 標(biāo)準(zhǔn)品⑦（1000 μg/mL） | 1 mL | 1 mL × 5 |
| BSA 標(biāo)準(zhǔn)品⑧（1500 μg/mL） | 1 mL | 1 mL × 5 |
| BSA 標(biāo)準(zhǔn)品⑨（2000 μg/mL） | 1 mL | 1 mL × 5 |
A.試管配制
1.以50:1的比例混合BCA試劑A和BCA試劑B。即將50ml BCA試劑A與1ml BCA試劑B混合。
注意: 使用以下公式確定所需工作試劑的總量： (標(biāo)準(zhǔn)品+待測樣品) x (重復(fù)次數(shù)) x (每個樣品所需要的BCA工作液) =所需BCA工作液總體積。
2.將100μL每種標(biāo)準(zhǔn)品和待測蛋白質(zhì)分別添加到單獨(dú)的標(biāo)記好的試管中，如表1。
表1：白蛋白(BSA)標(biāo)準(zhǔn)品
| 孔編號 | A | B | C | D | E | F | G | H | I |
| 添加物 | 標(biāo)準(zhǔn)品① | 標(biāo)準(zhǔn)品② | 標(biāo)準(zhǔn)品③ | 標(biāo)準(zhǔn)品④ | 標(biāo)準(zhǔn)品⑤ | 標(biāo)準(zhǔn)品⑥ | 標(biāo)準(zhǔn)品⑦ | 標(biāo)準(zhǔn)品⑧ | 標(biāo)準(zhǔn)品⑨ |
| 體積（μL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
BSA終濃度（ μg/mL） | 0 | 25 | 125 | 250 | 500 | 750 | 1000 | 1500 | 2000 |
3.在每個試管中加入2 ml BCA工作試劑并充分混合。
4.在37°C下孵育30分鐘。
注意：增加孵育時間和溫度會增加每次測試的凈562 nm吸光度, 并同時降低試劑盒的低檢測水平和試范圍.
5.將所有管子冷卻到室溫(RT)。
6.將分光光度計的波長設(shè)置為OD 562nm。用水將儀器校準(zhǔn)為零。隨后在10分鐘內(nèi)測量所有樣品的吸光度。
注意: 即使冷卻至室溫后，色彩仍會繼續(xù)顯影。但是，如果所有吸光度測量均在10分鐘內(nèi)進(jìn)行，則隨后在RT處的顯影太弱而不會產(chǎn)生明顯的誤差。
7.從所有讀數(shù)中減去空白的OD562。
8.繪制BSA標(biāo)準(zhǔn)曲線: OD562 (Y軸) vs BSA標(biāo)準(zhǔn)濃度 (X軸)。 使用標(biāo)準(zhǔn)曲線確定每個待測樣品的蛋白質(zhì)濃度。
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