血清/血漿microRNA提取試劑盒
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
Serum/Plasma microRNA Kit 血清/血漿microRNA提取試劑盒 | HRN0162 | 50T |
產(chǎn)品描述
目前對RNA干擾和調(diào)節(jié)性小RNA的研究，需要一種能有效提取15-30核苷酸左右大小RNA（包括siRNA和miRNA）的試劑盒。但是傳統(tǒng)的RNA提取方法如硅膠膜不能有效吸附回收，酚/胍抽提和異丙醇或者乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA，對于血清血漿樣本更是由于其自身特點更難提取。本試劑盒采用的裂解液迅速直接裂解血清血漿RNA酶，強烈有機抽提去除蛋白和DNA，RNA包括微小分子RNA在高濃度乙醇下吸附于離心柱內(nèi)特殊硅基質(zhì)膜， 再通過一系列特殊漂洗液快速的漂洗－離心的步驟，漂洗液將細胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)進一步去除， 最后低鹽的洗脫液將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品特點
1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.也不需要異丙醇或者乙醇沉淀等容易喪失微小分子RNA的步驟。
3.特殊的裂解液配方，可以處理更多的血清/血漿樣品。
4.多次柱漂洗確保高純度，可用于RNAi，RT-PCR，Northern-blot和各種實驗。
適用范圍
適用于從動物及人體血漿和血清中純化包括miRNA的無細胞總RNA
產(chǎn)品組分
| 組分 | 儲存溫度 | 50T |
Lysis buffer | 4°C避光 | 50mL |
| Wash Solution 1 | 室溫 | 12mL 第一次使用前加入28ml無水乙醇 |
| Wash Solution 2/3 | 室溫 | 10mL 第一次使用前加入42ml無水乙醇 |
| RNase-free H2O | 室溫 | 10mL |
RNase-free吸附柱RA和收集管 | 室溫 | 50套 |
運輸和保存方法
1）本試劑盒在室溫儲存6個月不影響使用效果。
2）所有的溶液應(yīng)該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時溶液可能形成沉淀，此時不應(yīng)該直接使用，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。
3）不合適的儲存于低溫（4℃或者－20℃）會造成溶液沉淀，影響使用效果，因此運輸和儲存均在室溫下（15℃－25℃）進行。
4）Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用幾天后出現(xiàn)沉淀晶體，并不影響使用，直接不吸晶體，吸上清使用就可以。
5）避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。
注意事項
1.第一次使用前請先在Wash Solution 1瓶和Wash Solution 2/3瓶中加入量乙醇，加入后請及時打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入。
2.除說明外，所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達到13，000 rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。
3.需要自備乙醇，氯仿。
4.Lysis buffer 和Wash Solution 1含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
5.預(yù)防RNase 污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1)經(jīng)常更換新手套。因為皮膚經(jīng)常帶有細菌，可能導(dǎo)致RNase 污染。
2)使用無RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3)RNA 在裂解液中時不會被RNase 降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小時，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分鐘，然后用水清洗，再滅菌，即可去除RNase。
4)配制溶液應(yīng)使用無RNase 的水。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%( v/v)，37℃放置過夜，高壓滅菌。）
6.RNA 純度及濃度檢測：
通常情況下通過測量OD260值可以知道RNA產(chǎn)量，測量OD260/OD280 比值可以是衡量蛋白質(zhì)污染程度的指標(biāo)之一，但是由于血清/血漿的RNA含量特別低，已經(jīng)低于分光光度計測量的下限，無法測量準(zhǔn)確，因此一般無法通過測量OD值或者比值的方法來判斷純度或者濃度，只能通過下游做熒光定量RT-PCR來判斷產(chǎn)量。同時無細胞的血清/血漿中的RNA主要是小于100 nt的小RNA，因此傳統(tǒng)的電泳檢測RNA完整性并不適用于血清/血漿RNA
7.本產(chǎn)品僅作科研用途！
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