產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
HRbio™ Probe qPCR Mix hUDG熱啟動探針法定量PCR Mix（含抗體修飾熱啟動酶+hUDG） | HRF0071 | 100T |
產(chǎn)品描述
HRbio™ Probe qPCR Mix hUDG 是一款適用于DNA模板(如DNA病毒)的探針法qPCR DNA 聚合酶，以其的定量性被廣泛應(yīng)用，并能有效的防止污染，核心組分Taq HS DNA Polymerase是基于抗體法修飾，經(jīng)過升級改造提升模板親和能力的新一代熱啟動DNA聚合酶。
產(chǎn)品組分
Mix 組分 | (100T) |
5×qPCR Buffer | 1000 μL |
Probe qPCR Mix hUDG | 120 μL |
a、內(nèi)含dUTP 及含鎂離子 buffer.
b、內(nèi)含 AB-HS Taq DNA polymerase
運(yùn)輸與保存方法
-20 ℃,保質(zhì)期1年。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1、qPCR反應(yīng)；
2、高特異性和高靈敏度。
體系配制（以50μL反應(yīng)體系為例）
組分 | 體積 |
5×qPCR Buffer | 10 μL |
上游引物（20μM） | 0.5μL(variable) |
下游引物（20μM） | 0.5μL(variable) |
探針（20μM） | 0.25μL(variable) |
DNA 模板 | 30 μL(variable) |
Probe AB-HS qPCR Mix | 1.2 μL |
volume | to 50 μL |
注： 1、引物一般在 0.1μM-1μM 之間進(jìn)行調(diào)整，一般情況下引物濃度在 0.2μM可達(dá)到理想的檢測效果；
2、探針濃度一般在 50nM-250nM 質(zhì)檢進(jìn)行調(diào)整；
3、擴(kuò)增片段的長度一般在 80bp-150bp 之間。
反應(yīng)條件
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) | 檢測熒光 |
25℃ | 5min | 1 | Off | |
預(yù)變性 | 95℃ | 3min | 1 | Off |
變性 | 95℃ | 15s | 45 | Off |
退火 | 60℃ | 30s | On |
注：1、預(yù)變性時間設(shè)置：由于本試劑用到的是抗體修飾酶，需要熱激活處理，一般建議預(yù)變性時間設(shè)為 95℃，3min。
退火溫度和時間設(shè)置：請根據(jù)引物的 Tm 值和目的基因的長度進(jìn)行調(diào)整。
熱啟動探針法定量PCR Mix
結(jié)果分析
1.擴(kuò)增結(jié)束無擴(kuò)增曲線
1）建議加入高濃度和高質(zhì)量的 DNA 模板確保反轉(zhuǎn)的成功；
2）引物是否降解，可以通過PAGE 膠確定其完整性；
3）反應(yīng)循環(huán)數(shù)不夠，一般將循環(huán)數(shù)設(shè)為 40-45 個循環(huán)；
4）確認(rèn)PCR 程序設(shè)置中是否設(shè)置了熒光采集過程。
2.CT 值出現(xiàn)過晚
1）反應(yīng)條件不夠優(yōu)化，可適當(dāng)降低退火溫度；
2）模板濃度過低或加樣量不足；
3）PCR 產(chǎn)物過長，一般PCR 產(chǎn)物推薦長度為 80-150bp。
3.陰性對照有明顯擴(kuò)增
1）Mix 液、ddH2O、引物和探針可能存在污染，更換新的重新進(jìn)行實驗。
注意事項
本產(chǎn)品僅供科研用途！
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