miRNA qPCR Kit miRNA熒光定量PCR試劑盒 產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 |
HRbio™ miRNA qPCR Kit miRNA熒光定量PCR試劑盒 | HRF0711 | 50T |
產(chǎn)品描述
HRbio™ miRNA qPCR Kit采用 SYBR Green I嵌合熒光法的原理進(jìn)行miRNA的熒光定量檢測(cè)。本產(chǎn)品包含miRNA qPCR所需要的所有試劑,組分分別是:2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。其中2×miRNA qPCR Mix(含SYBR Green)是專(zhuān)門(mén)為miRNA熒光定量檢測(cè)而特別研發(fā)的新一代預(yù)混液形式的qPCR試劑。其中DNA polymerase采用的是抗體修飾的熱啟動(dòng)形式,配合特殊的buffer體系,使得反應(yīng)特異性更好,靈敏度更高,并且在更廣的范圍內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確定量。
產(chǎn)品組分
編號(hào) | 組分 | HRF0711(125次×20 μl) |
HRF071-A | 2×miRNA qPCR Mix(with SYBR Green I) | 1.25 mL |
HRF071-B | Reverse primer(10μM) | 55 μL |
運(yùn)輸與保存方法
1.-20°C 避光保存至少 12 個(gè)月,使用前充分融解混勻。
2.2 ×miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)短期使用可放在 4°C,避免反復(fù)凍融。
3.Reverse primer(10μM )每次用完置-20°C 保存。
注意事項(xiàng)
1.miRNA 鏈cDNA 的加入量不要超過(guò)real time PCR 體積1/10。
2.對(duì)于特殊的檢測(cè)體系中,高含量的cDNA 模板易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增,根據(jù)所檢測(cè)miRNA 的豐度適當(dāng)?shù)南♂宑DNA(5-10倍或者100倍)。
3.本品中含有熒光染料Sybr Green I,保存本品或配制PCR反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。
4.2 x miRNA qPCR Mix不含參比染料ROX,客戶(hù)并根據(jù)qPCR儀器技術(shù)指導(dǎo)決定是否需要加ROX參比染料,用于消除信號(hào)本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差
5.為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
6.本產(chǎn)品僅作科研用途!
操作步驟
在室溫融化2 ×miRNA qPCR Mix和Reverse primer(10μM)。
使用時(shí)請(qǐng)將2 ×miRNA qPCR Mix上下顛倒輕輕均勻混合,避免起泡,并經(jīng)輕微離心后使用。如果試劑沒(méi)有混勻,其反應(yīng)性能會(huì)有所下降。注:請(qǐng)不要使用振蕩器混勻。
按照下表組分冰上進(jìn)行反應(yīng)液的配制:
組分 | 體積(μL) | 體積(μL) | 終濃度 |
2×miRNA qPCR Mix | 25 | 10 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
miRNA鏈cDNA模板 | X | X | - |
無(wú)菌超純水 | To 50 | To 20 | - |
熒光定量PCR試劑盒
【注】: 使用前務(wù)必充分混勻, 避免劇烈震蕩產(chǎn)生過(guò)多氣泡。
a) 引物濃度:通常引物終濃度為0.2 μM,也可以根據(jù)情況在0.1- 1.0 μM之間進(jìn)行調(diào)整。
b) 模板濃度:如模板類(lèi)型為未稀釋cDNA原液,使用體積不應(yīng)超過(guò)qPCR反應(yīng)總體積的1/10。
c) 模板稀釋?zhuān)篶DNA原液建議5- 10倍稀釋?zhuān)0寮尤肓恳詳U(kuò)增得到的CT值在20-30個(gè)循環(huán)為好。
d) 反應(yīng)體系:推薦使用20μL或50 μL ,以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。
e) 體系配制:請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制,并使用無(wú)核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管;推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。