GV3101(pSoup) 電激感受態(tài)細胞 產(chǎn)品規(guī)格 (CAT#: AE1002)
品目 | 描述 |
GV3101(pSoup) Elec | 50μl/支 |
pGs2 (control vector,10pg/μl) | 10μl |
保存條件(保質(zhì)期) | -80℃(12個月) |
基因型
C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pSoup-tetR)
產(chǎn)品說明
GV3101(pSoup)菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標簽——lifup抗性基因rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。
操作方法
1.0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。
2.取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,待其融化,加入1-5 μg質(zhì)粒DNA(質(zhì)粒體積不大于6ul,最好用試劑盒抽提,雙蒸水溶解),用手管底混勻,立即插入冰中,用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?;旌衔锟焖僖频诫姄舯校w上杯蓋,空管保留待用。
3.啟動電轉(zhuǎn)儀,設置參數(shù):C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此參數(shù)為Biorad 推薦,使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作),將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,電擊完成快速插入冰中,加入700 μl無抗生素的LB并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中,28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4.6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
(當平板只含有50 μg/ml kan 時,28℃培養(yǎng)48 h即可;平板中同時加入50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 時,需28℃培養(yǎng)60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90 h)。
GV3101(pSoup) 電激感受態(tài)細胞 本產(chǎn)品僅作科研用途!
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