文獻(xiàn)分享丨PEG與精氨酸：抗體純化中去除聚集體的得力助手

研究背景

抗體聚體的形成通常與抗體分子的疏水區(qū)域暴露、二硫鍵異構(gòu)化和分子間結(jié)構(gòu)域交換有關(guān)。這些聚體在細(xì)胞培養(yǎng)收獲物中含量較高，不僅降低抗體藥物的生物活性，還可能引發(fā)免疫反應(yīng)。鑒于這些聚體難以通過傳統(tǒng)的純化方法去除，因此開發(fā)高效的聚體去除方法，對(duì)于提高抗體藥物的質(zhì)量至關(guān)重要。

在這項(xiàng)研究中，研究人員選取了八種不同類型的層析填料，包括疏水相互作用（HIC）層析填料、羥基磷灰石（HA）層析填料和混合模式層析填料，對(duì)一種在CHO細(xì)胞中表達(dá)的單克隆抗體（mAb）進(jìn)行聚體去除測試。

實(shí)驗(yàn)中，首先使用Protein A和陰離子交換（AEX）層析法對(duì)抗體進(jìn)行初步純化，得到含有約14%聚體的中間產(chǎn)物。隨后，分別在不同的層析條件下，對(duì)這些層析填料的聚體去除能力進(jìn)行評(píng)估。

● 層析柱：所有填料都裝在直徑為0.66cm、床高為15cm的柱子中。使用不同的緩沖液配方進(jìn)行層析實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在典型線性鹽梯度層析條件下，CEX層析無法有效分離單體和聚體。但在洗脫緩沖液中添加PEG，可以顯著提高分離效果，使單體和聚體分離，且通過進(jìn)一步開發(fā)分步洗脫方法保持產(chǎn)品質(zhì)量和收率。這表明PEG的添加可以顯著提高CEX層析的分離效果。

HIC和HA填料在去除聚體方面表現(xiàn)出強(qiáng)大的能力。混合模式層析填料也顯示出良好的聚體去除效果。

在純化過程中添加PEG和/或精氨酸可以顯著提高分離效果，尤其是在CEX層析中，PEG的添加可使單體和聚體分離。

對(duì)于每種填料，需要通過實(shí)驗(yàn)確定操作參數(shù)，以實(shí)現(xiàn)聚體清除和單體回收率。在大規(guī)模生產(chǎn)中，步階洗脫比線性梯度洗脫更有利于減少處理時(shí)間和洗脫體積。

相關(guān)產(chǎn)品信息

在抗體聚體去除方面，選擇合適的層析填料至關(guān)重要。無論您是進(jìn)行基礎(chǔ)研究還是工業(yè)化生產(chǎn)，博格隆的填料都能為您提供可靠的解決方案。