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細菌凍干機:凍干保存細菌方法及步驟
發(fā)布時間:2018-4-6一、所用培養(yǎng)基/液:LB培養(yǎng)液,TSB培養(yǎng)液,FT培養(yǎng)液,麥康凱培養(yǎng)基,TSC培養(yǎng)基,TSA培養(yǎng)基等。
二、 凍干保護劑:10%脫脂奶粉,5%蔗糖,1%明膠,溶于純水中。
三、 其他試劑:小牛血清,NAD,環(huán)絲氨酸等。
四、 常見細菌:大腸桿菌、魏氏梭菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、鴨疫里默氏桿菌、副豬嗜血桿菌等。
五、 操作步驟:
1. 所用培養(yǎng)基及凍干保護劑均高壓滅菌;
2. 取分離所得細菌菌液或甘油保存的細菌一環(huán),在培養(yǎng)板上分區(qū)或蛇形劃板(大腸桿菌在麥康凱平板上劃板),37℃倒置培養(yǎng)過夜;
3. 取一只干凈的試管,倒入約10mL培養(yǎng)液(大腸桿菌用LB培養(yǎng)液),從培養(yǎng)過夜的平板中挑取一個單菌落于該培養(yǎng)液中,37℃振蕩培養(yǎng)過夜;
4. 取10個干凈的西林瓶,每瓶加入1mL凍干保護劑,再加入1mL培養(yǎng)過夜的菌液,蓋上橡膠塞,留出氣孔,標記好之后放入-80℃冰箱使其冷凍;
5. 細菌凍干機預熱約30min,迅速將已冷凍的菌液放于細菌凍干機上,一般十幾小時之后細菌已凍干,關閉凍干機,取出已凍干的細菌,壓蓋,放于-80℃超低溫冰箱保存,可達十年之久。