一、所用培養(yǎng)基/液：LB培養(yǎng)液，TSB培養(yǎng)液，FT培養(yǎng)液，麥康凱培養(yǎng)基，TSC培養(yǎng)基，TSA培養(yǎng)基等。

二、 凍干保護劑：10%脫脂奶粉，5%蔗糖，1%明膠，溶于純水中。

三、 其他試劑：小牛血清，NAD，環(huán)絲氨酸等。

四、 常見細菌：大腸桿菌、魏氏梭菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、鴨疫里默氏桿菌、副豬嗜血桿菌等。

五、 操作步驟：

1. 所用培養(yǎng)基及凍干保護劑均高壓滅菌；

2. 取分離所得細菌菌液或甘油保存的細菌一環(huán)，在培養(yǎng)板上分區(qū)或蛇形劃板（大腸桿菌在麥康凱平板上劃板），37℃倒置培養(yǎng)過夜；

3. 取一只干凈的試管，倒入約10mL培養(yǎng)液（大腸桿菌用LB培養(yǎng)液），從培養(yǎng)過夜的平板中挑取一個單菌落于該培養(yǎng)液中，37℃振蕩培養(yǎng)過夜；

4. 取10個干凈的西林瓶，每瓶加入1mL凍干保護劑，再加入1mL培養(yǎng)過夜的菌液，蓋上橡膠塞，留出氣孔，標記好之后放入-80℃冰箱使其冷凍；

5. 細菌凍干機預熱約30min，迅速將已冷凍的菌液放于細菌凍干機上，一般十幾小時之后細菌已凍干，關閉凍干機，取出已凍干的細菌，壓蓋，放于-80℃超低溫冰箱保存，可達十年之久。