制藥網(wǎng)
技術(shù)文章
【微課堂】泰林壓力蒸汽滅菌生物指示劑芽孢計(jì)數(shù)方法
發(fā)布時(shí)間：2024-3-22
《藥品GMP指南》生物指示劑的應(yīng)用中指出，實(shí)驗(yàn)室在接收商品化生物指示劑時(shí)，應(yīng)進(jìn)行微生物數(shù)量測定。
那么壓力蒸汽滅菌生物指示劑的總芽孢數(shù)是如何確定的呢？接下來為大家分享泰林壓力蒸汽滅菌生物指示劑的芽孢計(jì)數(shù)方法（121℃滅菌生物指示劑均選用嗜熱脂肪地芽孢桿菌 Geobacillus stearothermoρhilus ATCC7953）。
隨機(jī)抽取需檢驗(yàn)批次生物指示劑4片（支）與相關(guān)物品一并放入生物安全柜中，用酒精棉對指示劑初級(jí)包裝進(jìn)行擦拭，通風(fēng)15min以上，后續(xù)操作如下：
注意：物料準(zhǔn)備過程中，切勿使用紫外照射生物指示劑，可能會(huì)導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏低。
將生物指示劑轉(zhuǎn)移至生物安全柜內(nèi)，取出載體，加入到含3~4顆4mm~6mm玻璃珠和3mL無菌水的試管中，置于渦旋混勻儀上充分振蕩，將試管中載體打散成纖維狀后，再加入7mL無菌水，制成均一的菌懸液，該試管記為10-1（同步平行4片）。
將懸液式生物指示劑（直管式，規(guī)格：0.3mL/支），用直管切割器打開置于含9.7mL無菌水的試管中，置于渦旋振蕩儀上混勻，該試管記為10-1。
將上述10-1試管放置于95℃～100℃恒溫水浴鍋中熱激活15min，熱激活結(jié)束后立即放入 0℃～4℃冰水混合浴中迅速冷卻至室溫。
注：根據(jù)生物指示劑總芽孢數(shù)適當(dāng)調(diào)整稀釋級(jí)，建議最終稀釋芽孢數(shù)在30~300cfu/mL。
總芽孢數(shù)cfu/片（支）=平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)
嗜熱脂肪地芽孢桿菌（Geobacillus stearothermoρhilus）ATCC7953菌落形態(tài)呈米黃色、表面光滑、不透明圓形，菌落生長狀態(tài)良好，單一，無雜菌?？傃挎邤?shù)結(jié)果應(yīng)在產(chǎn)品標(biāo)定值的50%～300%范圍內(nèi)。
★切勿將生物指示劑進(jìn)行紫外照射消毒，建議對初級(jí)包裝進(jìn)行擦拭。
★應(yīng)按2020年版《中國藥典》要求，選擇無菌水作為稀釋液。
★吸取含紙質(zhì)載體的菌液時(shí)，避免纖維堵槍頭，導(dǎo)致移液不準(zhǔn)確。
★建議以單片（支）生物指示劑的形式進(jìn)行計(jì)數(shù)，確保每片（支）生物指示劑計(jì)數(shù)結(jié)果均符合要求。
★建議使用玻璃珠（4mm~6mm）對紙質(zhì)載體進(jìn)行打散處理。
★芽孢計(jì)數(shù)過程中必須進(jìn)行熱激活處理：溫度95℃~100℃，時(shí)間15min