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納米抗體技術(shù)發(fā)現(xiàn)服務(wù)平臺(tái)

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更新時(shí)間：2023-10-17 17:21:35瀏覽次數(shù)：243次

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泰克生物科技（天津）有限公司

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

產(chǎn)地	國(guó)產(chǎn)	級(jí)別	化工級(jí)

詳細(xì)介紹

泰克生物著力于為客戶(hù)提供高質(zhì)量，且具性?xún)r(jià)比的抗體藥物前期發(fā)現(xiàn)技術(shù)服務(wù)。我們?cè)谒幬锟贵w發(fā)現(xiàn)方面擁有10年的項(xiàng)目開(kāi)發(fā)經(jīng)驗(yàn)和心得，積累了充足的抗體定制和重組蛋白生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)?；谑删w展示技術(shù)（Phage Display Technology）平臺(tái)的服務(wù)，泰克生物能夠?yàn)榭蛻?hù)提供一系列包括但不限于兔源、鼠源、羊源、駝源及牛源等不同物種的單克隆抗體制備服務(wù)，及其配套的完整可追溯性文件體系。

噬菌體展示技術(shù)（即：納米抗體技術(shù)）是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，通常為M13噬菌體的P3蛋白，使外源基因隨外殼蛋白的表達(dá)而展示到噬菌體表面的生物技術(shù)。噬菌體展示的優(yōu)勢(shì)在于其展示納米抗體文庫(kù)中變異抗體基因的多樣性，各個(gè)重組噬菌體（常用噬菌體為M13噬菌體）表面展示出不同的抗原結(jié)合域，相較于傳統(tǒng)雜交瘤方法，噬菌體展示技術(shù)在抗體基因展示與篩選層面則具有非常突出的效率優(yōu)勢(shì)（如雜交瘤融合效率一般<0.4%，即1000次融合細(xì)胞中，大概4個(gè)融合子；而噬菌體展示輕松可以獲得10⁸-10⁹個(gè)正確抗體序列）。

█ 噬菌體展示抗體文庫(kù)構(gòu)建服務(wù)

泰克生物可為客戶(hù)提供駝源VHH納米抗體庫(kù)，scFv抗體庫(kù)，F(xiàn)ab抗體文庫(kù)構(gòu)建以及篩選服務(wù)。其中VHH納米抗體庫(kù)，又稱(chēng)為駝源重鏈抗體文庫(kù)，抗體分子量大小為15kDa，是駝源動(dòng)物產(chǎn)生的一種抗體。目前被廣泛應(yīng)用于CarT/Car-NK治療性的駝源VHH抗體（又被稱(chēng)為納米抗體）噬菌體展示發(fā)現(xiàn)路徑如圖1所示：

圖1基于噬菌體技術(shù)平臺(tái)的駝源VHH抗體發(fā)現(xiàn)服務(wù)

泰克生物還可以提供一系列的抗體驗(yàn)證服務(wù)，例如：通過(guò)GST pull-down或CO-IP策略檢測(cè)展示的蛋白質(zhì)與其他分子之間的相互作用或分離特定目標(biāo)、抗原抗體BLI親和力測(cè)定、細(xì)胞功能驗(yàn)證及細(xì)胞系體外驗(yàn)證等。

泰克生物提供的納米抗體庫(kù)具有豐富的多樣性和規(guī)模，是篩選所有抗原類(lèi)型以及選擇具有高親和力的功能性抗體的理想選擇。憑借多年的經(jīng)驗(yàn)，我們開(kāi)發(fā)了多種噬菌體平臺(tái)，可以為您定制特定的納米抗體文庫(kù)。如果您有興趣開(kāi)展噬菌體展示抗體項(xiàng)目，或者其他相關(guān)服務(wù)，例如抗體測(cè)序、scFv、Fab和Fc 融合蛋白等，請(qǐng)聯(lián)系我們！

█ 服務(wù)內(nèi)容和周期

步驟	服務(wù)內(nèi)容	QC標(biāo)準(zhǔn)	周期
Step1:蛋白表達(dá)	(1) 密碼子優(yōu)化+基因模板合成+表達(dá)載體構(gòu)建； (2) 質(zhì)粒抽提+轉(zhuǎn)染（哺乳表達(dá)系統(tǒng)）目的蛋白檢測(cè)（WB，SDS-PAGE）； (3) 蛋白表達(dá)放大+蛋白親和純化；	交付：表達(dá)載體，克隆甘油菌，重組蛋白3-3.5mg，純度>85%，標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告	4-6周
Step2:動(dòng)物免疫	(1) 動(dòng)物免疫4次，加強(qiáng)免疫一針，共計(jì)免疫5針； (2) 免疫前采集陰性血清，第4針采血進(jìn)行ELISA檢測(cè)血清效價(jià)； (3) 若第4針血清抗體效價(jià)（蛋白抗原>10⁵；多肽抗原>10⁴）滿(mǎn)足要求，則采血前7天再次加強(qiáng)免疫1針，如不滿(mǎn)足要求，則繼續(xù)常規(guī)免疫； (4) 效價(jià)合格，采血分離單核細(xì)胞；	動(dòng)物：背景清晰（年齡，性別，防疫情況）；免疫：蛋白抗原>10⁵；多肽抗原>10⁴；采血：數(shù)量100ml以上； PBMC細(xì)胞：>10⁵/vial	8-10周
Step3:模板cDNA制備	(1) PBMC總RNA提?。≧NA提取試劑盒） (2) 高保真RT-PCR制備cDNA（反轉(zhuǎn)錄試劑盒）	cDNA：反轉(zhuǎn)后>1ug/ul，膠圖分布均勻； cDNA模板總量>150ug；	1 天
Step4:噬菌體展示文庫(kù)構(gòu)建	(1) 以cDNA為模板，兩輪PCR法擴(kuò)增VHH基因； (2) 噬粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)化： VHH基因拼接噬菌粒載體，電擊轉(zhuǎn)化TG1宿主菌，構(gòu)建抗體庫(kù)，混合建庫(kù)電擊次數(shù)不低于30次（單靶點(diǎn)建庫(kù)，電擊次數(shù)不低于15次）； (3) 鑒定：隨機(jī)挑選24個(gè)克隆，PCR鑒定陽(yáng)性率+插入率 (4) 輔助噬菌體準(zhǔn)備：M13噬菌體擴(kuò)增+純化； (5) VHH展示文庫(kù)救援	文庫(kù)陽(yáng)性率：>90%；文庫(kù)插入性率：>90%；庫(kù)容：>10⁸	1-2周
Step5:文庫(kù)篩選（3輪篩選）(固相篩選)	(1) 抗原包被（單個(gè)蛋白篩選，常規(guī)默認(rèn)是固相篩選法或磁珠分選；細(xì)胞篩選方法需要單獨(dú)核算費(fèi)用）； (2) 默認(rèn)3輪篩選：壓力篩選，較大限度去除非特異性抗體； (3) 挑取96個(gè)克隆擴(kuò)增噬菌體+IPTG誘導(dǎo)表達(dá)+ELISA檢測(cè)陽(yáng)性克?。?/span> (4) 挑取全部陽(yáng)性克隆進(jìn)行基因測(cè)序（>20個(gè)，多達(dá)96個(gè)）；	ELISA陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：P/N>3； VHH篩選標(biāo)準(zhǔn)：CDR氨基酸序列不同	2-3周
Step6:抗體驗(yàn)證（體外驗(yàn)證）	(1) 將獲得的抗體序列構(gòu)建合適的表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)+親和純化+抗體蛋白定量； (2) Elisa驗(yàn)證抗體與抗原結(jié)合，進(jìn)行下游驗(yàn)證（交付EC50數(shù)據(jù)）; (3) BLI法驗(yàn)證抗體親和力； (4) 細(xì)胞功能驗(yàn)證：流式驗(yàn)證； (5) 驗(yàn)證細(xì)胞系（抗原受體過(guò)表達(dá)細(xì)胞系）；	交付：表達(dá)載體，克隆菌株，表達(dá)菌株，重組抗體蛋白1mg，純度90%；快速親和力測(cè)定結(jié)果；	4-6周